Rossolis

Posté le: 23.10.2011, 12:38:32

Bonjour,

Je voulais connaitre vos protocoles de décontamination (ou stérilisation) pour la mise en in-vitro de feuilles issues de plantes en pot standard (in vivo).

Par exemple feuille de cephalotus ou tige et feuille de drosera binata ou capensis. Comment ne pas "cramer" les feuilles avec le liquide stérilisant?

Quelles sont vos méthodes et dosages?

A+

Posté le: 23.10.2011, 21:50:13

Salut,

C'est très délicat comme opération et très rarement couronné de succès.
Les tissus sont ce qu'il y a de plus difficile à stériliser car soit la stérilisation est suffisante mais le tissu trop détérioré pour reprendre, soit la désinfection est insuffisante.

Pas de recette type idéale c'est l'expérience qui est la plus efficace car dépendante des concentrations de désinfectant mais aussi du tissu utilisé. Selon la partie prélevée, l'épaisseur, l'état de santé et de propreté les durées sont très variables et ce sont autant de paramètres différents.

Il y a bien cet article que tu peux consulter :
Culture in-vitro

Je conseillerai déjà dans un premier temps de préparer la plante quelques semaines en avance :
- bonne conditions sanitaires
- air ambiant propre
- arrosages à l'eau déminéralisée

Prélève ensuite plusieurs échantillons et varie le temps de stérilisation en prenant soin de noter les durées.

Bonne chance

Gérald

Posté le: 24.10.2011, 19:16:10

Merci pour l'info

A+

Paul

Posté le: 27.10.2011, 12:11:22

Salut Paul,

pour répondre à tes questions et compléter celles de Gérald:

Temps de stérilisation:

Graines: 1 min

Feuilles (uniquement de très jeunes feuilles de préférence encore en formation): 20 à 30 s

Pour te repérer, lorsque la feuille devient un peu transparante type salade laissée mariner un peu trop dans la vinaigrette, c'est que tu as dépassé la durée de contact optimale avec le désinfectant.

En terme de produit, tu peux utiliser de l'hypochlorite de calcium ou de sodium (Javel). L'alcool même concentré ne sert à rien car complètement inefficace sur les spores et d'une manière générale toutes les formes de résistance d'agents pathogène.

L'usage de chlore gazeux est à proscrire car trop hard pour les plantes et dangereux pour la santé.

Je rejoins Gérald sur la qualité de la plante mère. Inutile de travailler avec une plante malade ou sale (exemple: qui sort de la tourbière) car la désinfection sera très difficile pour ne pas dire impossible.

Dans les labos de production professionnels, les boutures in vitro se font à partir d'autres plantes in vitro stériles, pour éviter justement ces problèmes d'infection.

A+

Posté le: 14.12.2011, 22:21:34

Citation:

Dans les labos de production professionnels, les boutures in vitro se font à partir d'autres plantes in vitro stériles, pour éviter justement ces problèmes d'infection.

Ou partent alors de graine. J'ai déjà eu de bons résultats avec les graines de drosera. 1 min dans l'eau de javel était un grand maximum. Le plus souvent c'était 30 sec.

Pour comparer, avec la dionnée c'était 3 à 4 min.
La concentration de la javel utilisée est celle préconisé sur l'emballage (berlingot).

J'ai déjà eu cependant plusieurs réussite lors de désinfection de bouture. J'ai rarement fait plus que 7min et c'était un grand maximum.
Pour les tissus je me sers des bords coupés (quant tu prélèves sur la plante mère) comme repère. Lorsqu'ils commencent à devenir blanchâtre alors tu peux stopper. Mais c'est valable pour les tiges de plusieurs mm. Inutile de te dire que si tu fais pareil avec une feuille de pinguicula, tu n'auras rien du tout.

Pour les tiges ou feuille de type laurier, on rajoute parfois une goutte de savon histoire de dissoudre la cuticule et mieux désinfecter les surfaces.

Posté le: 15.12.2011, 13:08:25

Salut,

j'ai déjà réussi également à désinfecter des boutures pour les cultiver en in vitro mais je te rejoins sur le fait que la désinfection de graines est plus garantie.

Pour terminer sur les boutures, les racines sont très difficiles à désinfecter car poreuses ainsi que les vieilles feuilles où des germes peuvent à terme pénétrer l'intérieur de la feuille via les stomates.

A+

Lionel

Posté le: 28.01.2012, 13:44:47

Personnellement technique qui marche pas trop mal :

tu fait un premier passage en mouillant ( quelques goutes de savon vaisselle dans de l'eau distillée)

ce qui te permet de laver la plante et après tu réduis à 2-3min dans la javel ...

afin de stériliser un matériel quel qu'il soit il faut se rappeler qu'il faut un détergent + un désinfectant, la javel seul ne fait que désinfecter.